转appA-MxA基因猪PCR检测灵敏度及环境安全评价研究

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2014.09.003

畜牧兽医学报 ›› 2014, Vol. 45 ›› Issue (9): 1399-1403.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2014.09.003

转appA-MxA基因猪PCR检测灵敏度及环境安全评价研究

刘小丹^#，辛磊磊^#，樊俊华，孔思远，杨述林^*，李奎

（中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业部畜禽遗传资源与利用重点开放实验室，北京 100193）

收稿日期:2014-02-26 出版日期:2014-09-23 发布日期:2014-09-23
通讯作者: 杨述林，副研究员，E-mail:yangshulin@caas.cn
作者简介:刘小丹（1989-），女，湖北宜都人，硕士生，主要从事细胞工程与基因工程研究，Tel：010-62818180，E-mail:857414958@qq.com;辛磊磊（1986-），男，山东泰安人，硕士。二者并列为第一作者
基金资助:
“948”课题（2011-G11）；国家科技重大专项（2013ZX08010-003）；中国农业科学院科技创新工程（ASTIP-IAS05）；国家自然科学基金（31372276）

Analysis on PCR Detection Ability and Environmental Safety Assessment in appA-MxA Co-transgenic Pigs

LIU Xiao-dan^#，XIN Lei-lei^#，FAN Jun-hua，KONG Si-yuan，YANG Shu-lin^*，LI Kui

（Key Laboratory of Farm Animal Genetic Resource and Utilization of Ministry of Agriculture，Institute of Animal Science，Chinese Academy of Agricultural Sciences，Beijing 100193，China）

Received:2014-02-26 Online:2014-09-23 Published:2014-09-23

摘要/Abstract

摘要：

本试验旨在研究转appA-MxA基因猪中PCR检测外源基因的灵敏度及其通过粪便漂移到外界环境中的可能性。根据转基因猪目的基因植酸酶（appA）和抗粘液病毒（MxA）引物对不同浓度梯度的pcDNA-appA-MxA质粒进行PCR检测，评价常规PCR检测目的基因的能力；对适宜浓度的粪便DNA进行PCR检测来评价转appA-MxA基因猪外源基因是否经粪便漂移到环境中。PCR扩增结果表明，在10 μL PCR体系中对CMV-appA和CMV-MxA基因检测的最低浓度分别为2.4×10⁴和2.4×10³拷贝•μL^-1。克服粪便PCR抑制反应量的适宜转基因猪粪便DNA检测结果表明，其粪便DNA中不含任何外源基因。本试验结果表明，转appA-MxA基因猪体内的外源基因通过粪便漂移到外界环境中的概率极小，从一定程度上证明了转基因猪不存在环境安全问题。

Abstract:

This experiment was conducted to analyze PCR detection ability of exogenous gene in appA-MxA transgenic pigs and to study the possibility of exogenous gene drifting to the environment through feces.To analyze PCR detection ability of exogenous gene，a series of pcDNA-appA-MxA plasmids 10-fold diluted were amplified by PCR which taking primers designed according to appA and MxA genes in appA-MxA co-transgenic pig.Appropriate fecal DNA in transgenic pigs also be amplified by PCR to detect gene drift between feces and environment.Results of PCR showed that，the minimal concentration of CMV-appA and CMV-MxA in 10 μL PCR system were 2.4×10⁴ and 2.4×10³ copy•μL^-1，respectively.Detection results of appropriate fecal DNA from transgenic pigs which could overcome PCR inhibition showed that appA and MxA were not existed in feces from appA-MxA co-transgenic pigs.These results indicated that exogenous genes in transgenic pig could hardly be drifted into the environment through feces，and to some extent，transgenic pigs are safe to the environment.

中图分类号:

S828
S813.3

刘小丹，辛磊磊，樊俊华，孔思远，杨述林，李奎. 转appA-MxA基因猪PCR检测灵敏度及环境安全评价研究[J]. 畜牧兽医学报, 2014, 45(9): 1399-1403.

LIU Xiao-dan，XIN Lei-lei，FAN Jun-hua，KONG Si-yuan，YANG Shu-lin，LI Kui. Analysis on PCR Detection Ability and Environmental Safety Assessment in appA-MxA Co-transgenic Pigs[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2014, 45(9): 1399-1403.

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参考文献

［1］顾海，唐艳.从国外监管模式考察我国转基因食品的安全管理［J］.中国公共卫生管理，2006，（2）：40-41.
［2］连李军，王雷，张可炜.转基因食品安全性的争论与事实［J］.食品与药品，2006，8（11）：12-16.
［3］关海宁，徐桂花.转基因食品安全评价及展望［J］.食品研究与开发，2006，27（4）：172-175.
［4］MARKOULATOS P，SIAFAKAS N，MONCANY M.Multiplex polymerase chain reaction:a practical approach ［J］. J Clin Lab Anal，2002，16(1):47-51.
［5］COLMENERO J D，MORATA P，RUIZ-MESA J D，et al.Multiplex real-time polymerase chain reaction:a practical approach for rapid diagnosis of tuberculous and brucellar vertebral osteomyelitis ［J］.Spine，2010，35(24):1392-1396.
［6］KOCAGÖZ R，ONMU? O，ONAT I，et al.Environmental and biological monitoring of persistent organic pollutants in water-birds by non-invasive versus invasive sampling［J］.Toxicol Letters，2014，4274(14):2.
［7］李明，魏辅文，饶刚，等.非损伤性取样法在保护遗传学研究中的应用［J］.动物学报，2001，47（3）：338-342.
［8］王戎疆.粪便DNA分析技术在动物生态学中的应用［J］.动物学报，2001，47(6)：699-703.
［9］HEHEMANN J H，CORREC G，BARBEYRON T.Transfer of carbohydrate-active enzymes from marine bacteria to Japanese gut microbiota ［J］.Nature，2010，64(7290):908-912.
［10］鞠辉明，白立景，牟玉莲，等.大肠杆菌植酸酶appA2基因联合人MxA基因真核表达载体的构建及表达研究［J］.畜牧兽医学报，2010，41(12)：1550-1555.
［11］王珍丽，汪天平，汪奇志.粪便中日本血吸虫虫卵DNA的提取及PCR检测方法的优化［J］.热带病与寄生虫学，2008，6(3)：125-129.
［12］李宗菊，熊丽，桂敏，等.非洲菊基因组DNA提取及ISSR-PCR扩增模板浓度优化［J］.云南植物研究，2004，26(4)：439-444.
［13］MURRAY D，MEIDINGER R G，GOLOVAN S P，et al.Transgene and mitochondrial DNA are indicators of efficient composting of transgenic pig carcasses［J］.Biores Technol，2007，98(9):1795-1804.
［14］HEHEMANN J H，KELLY A G，PUDLO N A，et al.Bacteria of the human gut microbiome catabolize red seaweed glycans with carbohydrate-active enzyme updates from extrinsic microbes［J］.Proc Natl Acad Sci U S A，2012，109(48):19786-19791.
［15］朱士恩，崔文涛，王建武，等.转基因猪、牛和羊的环境安全评价技术研究［A］.中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十六届学术研讨会，2012：89.

[1]	王继英, 王彦平, 徐云华, 王诚, 蔺海朝, 呼红梅, 武英, 郭建凤. 鲁莱黑猪肌内脂肪含量、脂肪酸组成及其相关性状分析[J]. 畜牧兽医学报, 2017, 48(4): 585-594.
[2]	王萍，郝文艳，曹丽华，沈开元，代小丽，李海艳，梁贤威，石德顺，李湘萍. ssc-miR-148a启动子克隆及其特征分析[J]. 畜牧兽医学报, 2016, 47(10): 1969-1976.
[3]	丁荣荣，杨明，全建平，杨林雪，刘敬顺，刘佳，顾婷，刘德武，蔡更元，吴珍芳，杨杰. 杜长大三元杂交猪与皮杜长大四元杂交猪胴体性状和肉质性状比较研究[J]. 畜牧兽医学报, 2016, 47(9): 1795-1805.
[4]	孙浩，王子帅，徐银学，唐中林. H19基因的单核苷酸多态性与猪生长性状的相关分析及其时空表达[J]. 畜牧兽医学报, 2016, 47(5): 870-881.
[5]	韩立强，郭豫杰，鲁维飞，张欣，褚贝贝，王江，杨国宇. 猪MC4R基因突变体真核表达载体的构建及功能研究[J]. 畜牧兽医学报, 2016, 47(4): 679-685.
[6]	季久秀，方绍明，张震，曾治君，麻骏武，陈从英. 猪血糖、血脂与脂肪沉积性状的关联性分析[J]. 畜牧兽医学报, 2016, 47(4): 686-692.
[7]	张锁宇，邱小田，丁向东，张勤，王志刚，王长存，屈云龙. 利用关联组估计中国大白、长白及杜洛克猪繁殖性状的遗传参数[J]. 畜牧兽医学报, 2016, 47(3): 429-438.
[8]	洪潜龙，张颖，曹春伟，王宪龙，赵建国. 巴马小型猪OCA2基因序列、组织表达分析及载体构建研究[J]. 畜牧兽医学报, 2016, 47(3): 439-448.
[9]	李曼曼，温丙言，朱河水，钟凯，杨国宇，王月影. 猪lipasin基因的克隆及其对肝细胞LPL基因转录的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2016, 47(2): 411-416.
[10]	徐盼，张震，崔磊磊，杨斌，段艳宇. 白色杜洛克×二花脸资源家系猪血液性状的系统遗传学研究[J]. 畜牧兽医学报, 2016, 47(2): 232-240.
[11]	杨慧，方绍明，黄晓畅，陈从英，张志燕. 母猪杀婴行为的全基因组关联分析[J]. 畜牧兽医学报, 2016, 47(2): 241-248.
[12]	张冬杰，刘娣，张旭，汪亮，杨国伟. 利用CRISPR-Cas9系统定点突变猪MSTN基因的研究[J]. 畜牧兽医学报, 2016, 47(1): 207-212.
[13]	王晨，秦珂，薛明，莫德林，陈瑶生，刘小红. 全基因组选择在猪育种中的应用[J]. 畜牧兽医学报, 2016, 47(1): 1-9.
[14]	王守栋，房国锋，曾勇庆，陈伟，李川皓，王延东. F₁代转CuZnSOD基因猪的制备与研究[J]. 畜牧兽医学报, 2016, 47(1): 16-24.
[15]	陈晨，胡雄贵，朱吉，任慧波，邓缘，彭英林. 猪脂肪发育相关miRNAs的功能研究进展[J]. 畜牧兽医学报, 2015, 46(12): 2117-2126.

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