温度是影响动物生殖生理和发育的重要物理因素，可通过调节生物大分子的构象变化、热力学稳定性及分子间相互作用，影响细胞应激响应、程序性死亡、胚胎发育进程等。在动物胚胎发育早期，原始性腺呈现双向分化潜能，需经性别决定机制完成性别的最终确立。对于变温动物，环境温度在其胚胎发育关键期可主导性别分化。在恒温动物中，性别决定则主要由性染色体组成及核心性别决定基因的级联调控所决定，环境温度虽无法改变其遗传性别，但却是影响动物繁殖生理的重要因素。温度胁迫（热应激和冷刺激）可造成动物生殖细胞及其辅助细胞的氧化还原系统失衡、未折叠蛋白反应等，诱发细胞的程序性死亡，影响配子发生和配子质量，最终导致动物繁殖力的下降。

哺乳动物卵巢中存在大量处于不同发育阶段的卵泡，构成了雌性生殖资源的重要储备，但大部分卵泡在腔前阶段即发生闭锁或退化。腔前卵泡的体外培养可有效挖掘雌性动物的遗传及繁殖潜力，为体外胚胎生产提供丰富的卵母细胞来源。由于不同物种卵泡质地、大小及发育周期等方面存在差异，需根据实际情况选择适宜的分离与培养方法。此外，培养基类型、激素及细胞因子等对卵泡发育也具有重要影响。本文系统论述了哺乳动物腔前卵泡体外培养的研究进展，重点归纳了其分离方法、培养体系及关键影响因素，以期为生殖资源保护及动物体外受精、克隆等生物工程研究提供参考依据。

巨噬细胞是哺乳动物卵巢中最丰富的免疫细胞，其数量和分布在卵巢中会周期性发生变化，是卵巢生理各个方面的重要参与者。本文系统梳理了近年来卵巢巨噬细胞相关的研究成果，重点阐述其起源、分化路径及核心生理功能，全面分析巨噬细胞在卵巢生理过程及病理状态中的作用机制与调控规律，总结其在卵巢功能稳态维持中的价值。本文旨在整合现有研究进展，为深入解析卵巢生理调控机制、优化动物生殖调控技术研发提供新的思路与理论依据，同时为卵巢相关疾病的防治提供潜在研究方向。

高原动物的肠道微生物群落动态受低氧与高寒胁迫的显著影响。尽管动物高原适应性机制已被广泛研究，但肠道微生物在介导高原适应中的潜在作用仍被忽视。本文系统综述了高原动物肠道微生物与生态因子的相互作用，重点分析了低氧与高寒环境对菌群结构、基因、代谢功能及宿主的影响，并总结了肠道微生物通过肠-肝轴、胆汁酸代谢等途径通过调节能量代谢、氧化应激和消化吸收代谢帮助宿主适应极端环境的机制。本文从微生物组学角度为高原动物适应性进化提供新见解，为畜牧业生产中的抗逆育种措施提供参考。

粪菌移植（FMT）作为新兴微生物移植技术，在猪肠道菌群重建与疾病干预中展现应用潜力，其可有效解决与肠道微生物失调相关的生产与健康问题。然而，当前FMT在猪中的应用尚存在诸多矛盾点：粪菌悬液制备、供体菌群筛选缺乏统一标准，移植剂量与频率未量化，且仔猪应激程度难控、个体差异显著，同时粪菌制备中活菌易损耗，操作体系的标准化与安全性亟待提升。本文综述了猪领域FMT重塑肠道菌群的效果差异，分析了操作要点与现存挑战，建议通过建立标准化流程、优化供体筛选、提高活菌存活率、量化移植参数及加强个体适配性研究，推动FMT在养猪生产中的规范应用与临床转化。

肠道稳态的维持依赖于Na⁺、Ca²⁺、Cl^-、HCO₃^-等离子的动态平衡。离子浓度梯度决定了肠腔渗透压、酸碱环境和跨上皮电位差，共同构成营养吸收、黏液分泌及免疫防御的理化基础。作为介导离子转运的功能蛋白，肠道离子转运体通过动态调控离子的跨膜流动，保证了肠腔与上皮细胞间的离子交换和水分重吸收，从而维系肠道微环境稳态。因此，本文聚焦Na⁺/H⁺交换体、Na⁺/葡萄糖协同转运体、Cl^-/HCO₃^-交换体等关键离子转运体，阐明其激素响应、转录调控、翻译后修饰及膜转位调控等动态调节网络，并解析转运体功能异常导致的离子紊乱及其病理学关联，旨在为靶向离子转运体的疾病治疗策略提供理论依据。

作为具有免疫调节功能的多不饱和脂肪酸，α-亚麻酸（ALA）在慢性炎症性疾病中显示出多重调控效应。Th17细胞作为CD4⁺ T淋巴细胞的重要亚群，其异常活化与多种自身免疫性疾病的病理进程密切相关。本文系统阐述Th17细胞的生物学特性及其在免疫稳态失衡中的作用机制，重点总结ALA通过多靶点途径调节Th17细胞功能的分子基础，如：ALA可通过调控核受体RORγt的转录活性，抑制Th17细胞的分化进程并减少其细胞数量，从而降低IL-17、IL-21等促炎介质的生成。ALA可以通过干扰STAT3信号通路的磷酸化激活，阻断炎症信号传导。同时，ALA还可通过调节Th17细胞的脂质代谢通路和能量代谢途径，改变细胞的代谢特征，进而影响其免疫活性。本文通过对ALA在Th17细胞功能的多方面调控机制进行综述，指导Th17细胞介导的ALA精准营养干预策略，并为畜牧动物的健康养殖提供新思路。

熊果酸（ursolic acid，UA）是从天然植物中提取的一种具有生物学活性的五环三萜羧酸化合物，在植物茎、叶、果实和果皮中均有分布。UA具有广泛的生理功能，包括保护内脏器官、促进伤口愈合、抗菌、抗炎、抗病毒和抗肿瘤等效应。UA生理功能的机制研究常涉及对机体的表观遗传调控，然而，关于这方面的归纳总结还不够系统。本文试图从UA在自然界中的分布特点、生理功能以及对机体的表观遗传学调控机制研究进展等方面进行综述，以期为UA在畜禽生产中的开发应用提供理论支撑。

炎症性肠病（inflammatory bowel disease，IBD）是一种非特异性肠道慢性炎症疾病，已发展为全球人类公共健康问题。近年来，我国IBD发病率不断攀升，严重影响着我国民众身心健康。目前，传统的啮齿动物IBD模型在临床药物应用转化方面暴露出一定弊端，猪因与人在生理器官构造、消化系统功能、疾病发生机理等方面上具有更高的相似性和匹配度被视为理想的IBD研究大动物模型。本文总结了三种常见的化学性诱导剂（葡聚糖硫酸钠盐、三硝基苯磺酸、乙酸）在猪IBD疾病模型构建中的应用现状及存在的问题，同时从临床观察，炎症标志物、肠道微生物菌群等多水平上探讨IBD模型评价体系。本综述将为炎症性肠炎疾病模型猪的构建和评价，以及其潜在的临床药效评价应用提供参考。

大肠杆菌（Escherichia coli，E.coli）是畜禽养殖中常见的条件性致病菌，动物源E.coli的耐药性问题日趋严重，威胁公共卫生健康。异质性耐药作为一种特殊的耐药表型，近年来备受关注，即同一克隆来源的菌群中包含对某一抗菌药物敏感性不同的亚群，具有可在高药物浓度环境下存活、低频耐药亚群难以常规检测以及表型可逆性的特征，常导致临床治疗失败。本文系统综述了异质性耐药的分类、检测方法以及动物源E.coli异质性耐药的现状及分子机制，以期拓展对动物源E.coli异质性耐药的认知，为动物源细菌耐药性防控提供科学依据。

由猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae，M. hyopneumoniae）感染引起的猪支原体肺炎是一种普遍存在于世界各地猪群中的慢性呼吸道传染病，也是目前造成国内外养猪产业重大经济损失的疫病之一。猪肺炎支原体基因组大小为800~1 000 kb，G+C（%）含量低，可编码600多个蛋白，大约为大肠杆菌的1/5~1/4。基因组的多样性为猪肺炎支原体不同菌株的环境适应性创造了条件。迄今，已公布20株猪肺炎支原体全基因组完成图的测序结果。猪肺炎支原体基因组学研究对于其流行病学和致病机制研究以及防控措施的优化都尤为重要。本文总结了上述20株猪肺炎支原体的全基因组测序信息，分析了这20株猪肺炎支原体基因组的共线性特征，并综合近年来猪肺炎支原体的基因组学研究报道，分类介绍猪肺炎支原体重要功能基因，总结了基于多基因分型的猪肺炎支原体流行特征，旨在从全基因组水平深入解析猪肺炎支原体的物质能量代谢与生存适应机制，阐明其致病与免疫逃避的机制，为挖掘新型药物靶点与疫苗候选抗原，以及制定精准的流行病学防控策略提供理论依据。

胞外核苷三磷酸二磷酸水解酶（ectonucleoside triphosphate diphosphohydrolases，E-NTPDase）是CD39/GDA1家族成员，能够水解ATP/ADP至AMP，在嘌呤能信号调控中具有核心作用。多种寄生虫在表面或分泌物中高表达该酶，以满足嘌呤需求、促进黏附和侵袭，并通过分解宿主ATP降低炎症信号、生成腺苷实现免疫逃逸。本文通过文献综述的方式，总结了近年来关于寄生虫E-NTPDase在分子特征、表达定位以及功能作用方面的研究进展，并结合药理学与免疫学试验结果进行分析。研究表明，E-NTPDase活性与寄生虫的感染力和慢性感染密切相关，而药物抑制剂或免疫阻断可显著削弱其致病性。因此，E-NTPDase不仅是理解寄生虫与宿主互作的重要切入点，也为开发新型抗寄生虫疗法提供了潜在靶标，但如何实现对寄生虫E-NTPDase的选择性干预、避免宿主副作用，仍是未来亟待解决的关键问题。

畜禽呼吸道疾病严重威胁养殖业健康发展，传统抗生素和疫苗防控面临耐药性与免疫抑制等挑战。近年来，“微生物-肠-肺轴”理论的提出为中兽医“肺与大肠相表里”理论提供了现代科学依据，揭示了肠道菌群及其代谢产物通过循环系统、免疫调节和神经内分泌网络与肺部形成双向通讯，在呼吸道疾病发生发展中发挥关键作用。中药凭借多成分、多靶点的特性，通过调节微生物-肠-肺轴展现出独特的防治优势。本文系统综述了中药通过以下途径干预微生物-肠-肺轴的作用机制：1）菌群代谢途径：中药活性成分（如黄芩苷、隐丹参酮）被肠道菌群代谢为短链脂肪酸、胆汁酸等活性分子，通过激活FFAR2受体或抑制TLR4/MyD88通路调控肺部免疫；2）肠道屏障途径：单宁酸、三七皂苷等上调紧密连接蛋白（ZO-1/Occludin/Claudin）和黏蛋白MUC2表达，修复肠道屏障，阻断内毒素异位；3）免疫调节途径：鱼腥草提取物、罗汉果苷等纠正Treg/Th17细胞失衡，抑制NLRP3炎症小体活化；4）神经内分泌途径：虎杖苷-姜黄素激活GABA受体，凉膈散调控α7nAChR介导的线粒体自噬，缓解神经源性肺损伤。本文还总结了当前研究的局限性及未来方向，以期为中药防控畜禽呼吸道疾病提供理论依据和创新策略。

骨关节炎是导致中老年动物疼痛和功能障碍的主要原因。该病不仅导致动物生产性能下降，还影响生活质量和动物福利，造成严重的经济损失。传统药物治疗方法存在药物靶向性差、滞留时间短、生物利用度低、毒副作用大等局限性。近年来，随着纳米给药技术的不断发展，关节腔内注射纳米材料克服了传统药物在关节内的屏障和快速清除，实现了药物的长效、靶向、高效递送，为骨关节炎的治疗提供了创新思路。本文全面回顾和系统总结关节腔内注射纳米材料在动物骨关节炎治疗中的试验应用进展，重点聚焦于靶向药物递送与滞留、促进再生修复、实现抗炎抗氧化作用的潜在机制。通过深入研究纳米给药技术的应用前景，为动物骨关节炎治疗策略创新及未来纳米材料设计和药理学研究提供理论基础。

兽用疫苗为我国动物疫病防控和养殖业健康发展做出了重要贡献。安全有效、质量可控是兽用疫苗的必备特质，其中安全性是前提和保障。本文对兽用疫苗安全性评价的政策法规、研究现状及发展趋势进行详细综述，尤其对组织病理学技术在疫苗安全性评价中的应用做了详细探讨，以期为完善兽用疫苗全生命周期安全评价方法、研究制定兽用疫苗安全性评价通用标准奠定基础。

旨在鉴定鸡前脂肪细胞（ICP1）分化过程中脂肪生成基因的3′-UTR动态变化。本研究以鸡永生化前脂肪细胞系（ICP1）为试验材料，试验设置0、24、48、72、96和120 h共6个时间点分组。采用160 μmol・L⁻¹油酸诱导细胞分化，通过油红O染色观察分化0和120 h脂滴沉积并定量分析脂肪生成；利用qRT‑PCR检测成脂标志基因（PPARγ、FABP4）与目的基因（BMP2、PDK1、LPL、LDAH）的mRNA表达水平；采用3′‑RACE技术及测序验证BMP2和PDK1基因3′‑UTR长度变异。所有试验均设置3次生物学重复及相应技术重复。结果表明：在不同分化时期各基因的表达水平均存在差异，其中BMP2和PDK1在分化前期（24~48 h）的基因表达水平明显高于后期，而LPL和LDAH基因表达水平则随细胞分化程度逐渐升高，在48 h时达到最大，随后随着分化时间的增加而逐渐下降；BMP2、PDK1和LPL基因在ICP1细胞分化过程中分别转录出5条、4条和4条不同3′-UTR长度的转录本；此外，通过定量分析发现BMP2和PDK1基因在细胞分化前期（0、24 h）主要表达3′-UTR长转录本，随着分化进行，BMP2在96和120 h时长、短转录本同时存在且表达水平相同，而PDK1在48、72、96和120 h时长、短转录本表达水平相同。进一步分析发现，与0 h相比，48 h时BMP2和PDK1基因倾向于表达3′-UTR更长的转录本。鸡前脂肪细胞分化过程中脂肪生成基因有不同3′-UTR长度转录本的表达，且在分化过程不同3′-UTR的转录本表达具有显著差异。研究结果为深入探讨APA调控基因转录进而影响细胞分化的分子机制提供了新素材和方向。

旨在优化绵羊成纤维细胞肌肉生长抑制素（myostatin，MSTN）基因胞嘧啶碱基编辑的条件，为MSTN基因编辑绵羊制备提供技术支撑。本试验以原代湖羊成纤维细胞为对象，针对绵羊MSTN基因第三外显子设计sgRNA、构建表达质粒，设置不同参数依次优化湖羊成纤维细胞中电穿孔递送质粒的浓度、电压、脉冲时长和脉冲次数，在此基础上，将胞嘧啶碱基编辑载体BE3、hA3A-BE3及工程化改造的ehA3A-D131Y-Y132D-BE3分别与sgRNA质粒电穿孔共转染湖羊成纤维细胞，通过Sanger测序分析各编辑器在MSTN基因位点的编辑效率和潜在脱靶。结果显示，成功构建表达载体sgRNA-MSTN；质粒浓度为300 ng·μL^-1、电压275 V、脉冲时长2.5 ms、脉冲次数2次条件下电穿孔递送效率最高，达到62.2%，细胞成活率超80.0%；ehA3A-D131Y-Y132D-BE3对湖羊成纤维细胞中MSTN基因的碱基编辑效率最高，达到84.0%；对5个潜在脱靶位点进行检测均未发现脱靶。综上，研究提供了绵羊成纤维细胞高效电穿孔递送胞嘧啶碱基编辑系统的方法，筛选出高效胞嘧啶碱基编辑器ehA3A-D131Y-Y132D-BE3，为通过碱基编辑成纤维细胞高效制备MSTN基因编辑绵羊奠定了技术基础。

为构建阿瓦西羊（Awassi sheep）高质量参考基因组，支撑其遗传资源开发与育种研究。本研究以1只健康的雌性阿瓦西羊（年龄1.5岁，体重50 kg）为试验材料，采用单样本测序策略，整合PacBio HiFi长读长测序与Hi-C辅助组装技术，完成染色体级基因组组装，并评估其连续性和完整性。阿瓦西羊基因组染色体组装水平总长2.87 Gb，N50达98.44 Mb（包含9条染色体片段），GC含量43.26%；初步组装contig N50为81.37 Mb，总长2.93 Gb，GC含量43.63%。与绵羊参考基因组ARS-UI_Ramb_v2.0（2.6 Gb，scaffold N50 101.3 Mb）相比，核心组装指标相近，表明组装连续性良好。BUSCO评估（基于鲸偶蹄目cetartiodactyla_odb10数据集）显示，13 335个BUSCO基因中完整型占比95.9%（单拷贝93.6%、重复2.3%），碎片型和缺失型分别仅占0.9%和3.2%。该完整率在已发表的绵羊基因组组装中处于较高水平，优于多数同类研究，证实本研究所获得的基因组具有优异的完整性。Hi-C技术锚定到染色体，互作图显示清晰的染色体内交互信号；共线性分析表明，阿瓦西羊与ARS-UI_Ramb_v2.0基因组存在广泛保守区块。本研究构建的阿瓦西羊染色体级基因组填补了该品种参考基因组空白，为深入解析其产奶性状、抗逆性等性状的遗传基础提供了关键数据支撑，也为后续功能基因挖掘与分子育种研究奠定了重要基础。

为了挖掘影响皖临白山羊体高和胸宽性状的重要候选基因与遗传位点。本研究收集了208只6月龄皖临白山羊体高和胸宽表型数据，并对其中27只个体进行10×全基因组重测序，181只个体进行1×全基因组重测序。依次利用STITCH和Beagle软件对低深度重测序数据进行基因型填充，基于混合线性模型（MLM）对体高和胸宽开展全基因组关联分析（GWAS），对显著相关的SNPs位点进行基因注释以及转录因子结合位点预测，并对候选基因开展GO、KEGG富集分析。结果显示，基因型填充后一致性达到99.1%。GWAS共鉴定到102个与体高显著相关的SNPs，预测到7个转录因子结合位点，相关基因GO分析主要富集到前后模式形成、RNA聚合酶II特异的DNA结合转录因子活性等21个条目；胸宽共筛选到155个显著相关的SNPs，预测到8个转录因子结合位点，相关基因GO分析主要富集到腺苷酸环化酶激活型G蛋白偶联受体信号通路、谷氨酸能突触传递等37个条目，KEGG富集分析提示与破骨细胞分化、代谢途径等通路相关。本研究鉴定到GBA3和RND3为体高性状的重要候选基因，NR2F1、FEZF2、ITGA6、POU3F2为胸宽性状的重要候选基因，发现chr6：42672857、chr22：38679770、chr22：38671507这3个转录因子结合位点的改变可能影响体高和胸宽性状，研究为肉用山羊分子育种提供了重要遗传标记。

旨在通过全基因组重测序技术分析承德无角山羊群体遗传多样性、亲缘关系和近交系数，为摸清承德无角山羊种群现状，优化选育方案，提高选种效率，促进种群可持续发展提供支撑。本研究利用全基因组重测序技术对80只（公羊18只，母羊62只）成年健康的承德无角山羊进行测序、质控，以获取高质量、高密度SNPs变异位点信息。随后使用GCTA（v1.94）、Plink（v1.90）、Mega X（v10.0）等软件进行主成分分析（PCA）、状态同源距离计算（IBS）、基因型亲缘关系G矩阵构建、亲缘系数计算、NJ聚类分析、群体遗传多样性分析和基因组近交系数估计。结果显示，所有样本中位于29条常染色体上的高质量SNPs位点有2 861 149个；主成分分析中个体分布处于分散状态，没有出现明显分层，表明该种群与其他山羊品种之间存在血统交流；种群中的18只公羊分为10个家系，家系1和家系6亲缘关系最远，家系2、3、4、5、8仅各含有1只公羊，家系7和9各含有2只公羊，10个家系以外的“其他”中的27只母羊与所有公羊亲缘关系系数均小于0.1；群体平均近交系数F_ROH值为0.003 36，92.5%的羊近交系数≤0.01，表明群体整体近交水平较低；样本群体的多态性信息含量（PIC）中处于0~0.15的SNP位点占比71.37%，属于低多态性SNP位点，表明群体遗传多样性偏低。承德无角山羊群体中的18只公羊被分为10个家系，其中家系2~5，家系7~9公羊数量较少。群体的遗传多样性处于较低水平，但与其他山羊品种之间存在血统交流。为避免家系遗传资源流失，可适度扩大繁育规模，加速提升有效群体数量。

旨在构建三河牛临床乳房炎风险评估模型，对奶牛发生乳房炎的风险进行预测，并对乳房炎高风险牛只发出预警。本研究基于1 450头三河牛共计13 850条奶牛群体改良（dairy herd improvement，DHI）记录，首先对三河牛临床乳房炎预测体细胞数（somatic cell count，SCC）划分标准进行初步探索，并以此为依据，构建随机森林（random forest，RF）、逻辑回归（logistic regression，LR）、支持向量机（support vector machine，SVM）及极端梯度提升（extreme gradient boosting，XGBoost）四种机器学习模型；由于数据存在不平衡现象，因此构建模型前通过混合采样的方式改善数据不平衡对模型预测性能的影响。结果表明，SCC超过60万·mL^-1的分组中产奶量、总蛋白量及总乳脂量均显著低于SCC小于60万·mL^-1分组（P<0.05）；以60万·mL^-1作为预测三河牛临床乳房炎SCC的划分标准构建4种机器学习模型，其中，RF的预测价值及对高风险个体的识别能力最优；通过约登法选择模型最优决断阈值后能进一步提升RF对高风险个体的预测能力；对RF特征重要性进行剖分，发现泌乳月份、尿素氮及产奶量对三河牛临床乳房炎的发生具有重要影响。本研究构建的三河牛临床乳房炎风险评估RF，分别从数据、算法及模型评价角度提高模型的预测性能，其测试集准确率为0.85、受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic curve，ROC）的曲线下面积（area under curve，AUC）为0.81，在科研及生产中均具有广泛应用价值。

旨在探究核受体辅阻遏子 1 （nuclear receptor corepressor 1，NCOR1）对秦川牛前体脂肪细胞增殖和分化的影响，通过转录组测序（RNA sequencing，RNA-Seq）及染色质免疫沉淀测序（chromatin immunoprecipitation sequencing，ChIP-Seq）数据联合分析，明确该基因在秦川牛前体脂肪细胞成脂分化过程中潜在的作用机制。本试验采集成年秦川公牛（36月龄）的心、肝、脾、肺、肾、肌肉、皮下脂肪、肾周脂肪、大肠和小肠组织，并从新生公牛肾周脂肪组织分离前体脂肪细胞，每个样本3个生物学重复。本研究对秦川牛NCOR1基因进行时空表达分析，利用腺病毒介导的干扰技术在秦川牛前体脂肪细胞中干扰NCOR1基因，采用流式细胞术、EdU染色、油红O染色、RT-qPCR等试验方法探究NCOR1基因对秦川牛前体脂肪细胞增殖和分化的影响；进一步通过RNA-Seq联合ChIP-Seq数据库筛选其作用信号通路及互作基因。结果表明，NCOR1在小肠中的表达量较高，在肾周脂肪、脾、肾、肺、皮下脂肪组织中的表达水平中等；相比第0天，NCOR1基因表达水平在诱导分化早期第2天显著被抑制（P<0.01），随后逐渐升高并在第6天达到峰值（P<0.01），最后在终末分化期（D8~D10）逐步回落。干扰NCOR1导致G1/S细胞周期转变阻滞，显著抑制秦川牛前体脂肪细胞增殖，细胞周期相关基因CCNA1表达下调（P<0.05），而细胞周期阻滞相关基因P21、P27表达上调（P<0.01）。RT-qPCR分析表明，干扰NCOR1显著上调了C/EBPβ、FABP4、SREBF1、LPL基因的表达（P<0.01），从而促进秦川牛前体脂肪细胞成脂分化。RNA-Seq分析发现，干扰NCOR1基因后上调的差异基因（|\mathrm{l}\mathrm{o}{\mathrm{g}}_{\mathrm{2}}\mathrm{F}\mathrm{C}|>1、FDR<0.05）主要富集在PPAR、AMPK以及与能量代谢、脂质代谢相关的信号通路；而细胞周期、孕激素介导的卵母细胞成熟、P53信号通路及多种癌症相关通路被抑制。进一步通过对RNA-Seq差异基因进行蛋白互作（PPI）网络分析及 Cytoscape 核心基因筛选，联合ChIP-Seq数据库挖掘，发现NCOR1可能通过结合PPARGC1A和SREBF1基因并影响PPAR和AMPK 核心信号通路抑制秦川牛前体脂肪细胞成脂分化。综上，NCOR1基因促进秦川牛前体脂肪细胞的增殖过程及 G1/S期转换，抑制其成脂分化，且可能通过结合PPARGC1A和SREBF1基因并影响PPAR和AMPK核心信号通路抑制秦川牛前体脂肪细胞成脂分化。

旨在深入挖掘导致乌鬃鹅与狮头鹅不同发育阶段的腿肌肌内脂肪（IMF）沉积差异的候选基因。本研究以IMF含量存在显著差异的乌鬃鹅与狮头鹅为试验对象。分别采集胚胎期15 d（E15）、23 d（E23）与出壳后1日龄（1 d）的胚胎/雏鹅腿肌组织样本（每个品种每个阶段取3个重复样本），利用RNA-seq技术筛选出与腿肌IMF沉积相关的差异表达基因（DEGs）。RNA-seq共检测到19 507个基因，并鉴定出13 816个差异表达基因（DEGs）。对腿肌DEGs进行GO与KEGG富集分析，发现脂源性DEGs主要参与乙酰辅酶A生物合成、脂肪酸生物合成、脂质生物合成等8个生物学过程，且显著富集于脂肪酸代谢、鞘脂代谢、脂肪酸降解等16个信号通路，并确定了176个候选差异表达基因。通过RT-qPCR验证了选定的8个成脂关键基因LPL、PPARG、FASN、CAV1、GATA2、ACSL1、ACADL和MTTP的表达量，与RNA-seq结果一致（r≥0.93）。本研究发现，乌鬃鹅与狮头鹅胚胎期IMF沉积特征存在较大差异，筛选到的两鹅种脂源性差异表达基因为后续的分子标记辅助育种、基因编辑育种等技术提供数据参考。

为探究纳米氧化锌（ZnONPs）与大豆异黄酮（SI）联用对大浦莲猪精液冷冻保存的影响及机制。本研究选用6头15月龄纯种大浦莲猪，体重120~150 kg，设置6个处理组，在冷冻保存液中分别添加不同浓度ZnONPs、SI及二者组合，无处理冷冻保存液为对照组，每组3个重复，每个重复取3份精液样品进行检测；通过CASA系统分析精子质量，并采用qRT-PCR检测精子中相关基因的表达。结果表明，与对照组相比，ZnONPs显著降低了精子活力和存活率，升高丙二醛（MDA）含量（P<0.05），且下调了抗氧化相关基因的表达，上调了凋亡相关基因及糖代谢相关基因的表达（P<0.05）；单独添加0.05 mg·mL^-1 SI则对精液质量有改善作用（P<0.05）；联合添加SI能逆转ZnONPs对冷冻精液的损伤，显著提升精子质量，且调控其相关基因表达（P<0.05）。综上，0.2 mg·mL^-1 ZnONPs通过干扰抗氧化、凋亡及糖代谢相关基因表达损伤精液冷冻效果，0.05 mg·mL^-1 SI可通过调控上述基因增强抗氧化能力、抑制凋亡来改善精液冷冻效果，联合SI能缓解ZnONPs对冷冻精液的损伤。

旨在评估禁食诱导换羽（fasting-induced molting，FM）处理后老龄种公鸡生殖相关表型及下丘脑转录组特征的变化，并分析二者之间的关联。本研究选用60周龄的“豫粉1号”H系公鸡30只，按试验要求随机分为2组，对照组10只，处理组20只。记录处理组禁食前1天（F0）、禁食第15天（F15）和恢复饲喂第39天（R39）时的公鸡体重、血清中高密度脂蛋白胆固醇（high-density lipoprotein cholesterol，HDL-Cho）和低密度脂蛋白胆固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-Cho）的含量，并采集下丘脑组织进行转录组测序（RNA-seq）。在R39时，对各组公鸡的精液量、精子密度、精子活力和血清激素水平进行评估。结果表明，FM显著提高了公鸡的精子活力（P<0.05）和密度（P<0.05），尽管促卵泡激素（FSH）、促黄体生成素（LH）和睾酮（T）的水平呈现上升趋势，但差异未达统计显著性（P>0.05）。恢复饲喂后体重恢复正常，且LDL-Cho水平显著者上升（P<0.05）。RNA测序共识别出14 752个基因，其中7 030个基因表达差异显著，主要涉及神经活性配体-受体相互作用、ECM-受体相互作用、细胞粘附分子和黏着信号通路。禁食期间，神经肽如AGRP、NPY、POMC和GAL上调，而在重新进食后，神经发育相关基因如GPM6B和BASP1上调。免疫相关基因如CXCL12和GRP在禁食期间表达下调。蛋白相互作用分析揭示了AGT、NTS、TRHR和CCK等基因作为潜在的枢纽基因。本研究结果表明，下丘脑在FM过程中通过神经肽与代谢信号的转录变化，可能间接参与生殖系统功能的恢复。研究为深入理解诱导换羽对老年种公鸡的生殖恢复机制提供了初步的分子基础。

旨在揭示滩羊发情过程中“神经-内分泌-生殖”轴的神经递质变化特征，并探讨潜在调控机理。本研究在同期发情处理的滩羊群体中，随机选取6只母羊，利用靶向代谢组学测序技术监测滩羊发情后0、12和24 h血浆神经递质的动态变化。结果筛选出7种关键神经递质，它们主要富集在氨基酸代谢、矿物质吸收及谷氨酸能突触等神经信号调控通路（P<0.05），且在发情12 h后均具备较高的诊断价值（AUC>0.7）。其中3-羟基丁酸在发情后12 h显著上升（P<0.05），功能分析表明这似乎与排卵前能量准备有关；而甜菜碱醛氯化物、肌氨酸、色氨酸、苏氨酸、谷氨酰胺和谷氨酸均呈下降趋势，且在发情后24 h均显著低于发情开始时（P<0.05），提示发情早期动物体内较高的谷氨酸、谷氨酰胺和色氨酸水平参与维持下丘脑兴奋性并支持促性腺激素释放激素分泌。结果表明，神经递质在动物发情与排卵过程中充当重要角色，关键神经递质的发现丰富了“神经-内分泌-生殖”轴的调控网络，并为优化滩羊繁殖管理策略提供了关键分子靶点和理论依据。

旨在阐明分泌型磷酸蛋白1（secreted phosphoprotein 1，SPP1）在山羊妊娠早期胎盘组织中的时序表达特征及DNA甲基化调控作用，并探讨DNA甲基化对胎盘滋养层细胞功能的影响。本研究选取健康、体况相近的成年大足黑山羊母羊，按妊娠第20、25、30、45和60天分组，每组3只；采集胎盘组织后，利用苏木精-伊红（H&E）和过碘酸-雪夫（PAS）染色观察胎盘结构发育与滋养层细胞分布，利用免疫组织化学（IHC）、RT-qPCR、Western blot分析SPP1的定位及表达动态，并利用RT-qPCR检测其受体基因的时序表达变化；利用甲基化特异性PCR（MS-PCR）检测不同时期胎盘组织SPP1启动子区甲基化水平；培养并鉴定滋养层细胞，经5-Aza处理后评估DNMT1、DNMT3b、SPP1表达及细胞增殖和侵袭变化。结果显示，随着妊娠进展，胎儿滋养层逐渐由接触转向浅层侵袭，与母体肉阜形成紧密嵌合结构。SPP1在胎儿侧第25天和母体侧第20天胎盘组织中表达最高（P<0.01），主要定位于上皮及间质细胞；其受体ITGB1、ITGA2、ITGA3、ITGAV和CD44的表达在胎儿胎盘第25天或第30天后显著上升（P<0.05），而母体胎盘则在第20天或第25天高表达ITGB1、ITGB3、ITGB5、CD44和Wnt5a（P<0.05）。SPP1启动子在第25天胎儿和第20天母体胎盘中呈低甲基化状态，但各时期总体甲基化水平无显著差异（P>0.05）。细胞试验进一步表明，5-Aza可抑制DNMT1和DNMT3b表达并上调SPP1，同时减弱滋养层细胞增殖能力，促进其侵袭（P<0.05）。综上，SPP1在山羊妊娠早期胎盘中呈现阶段与部位特异性表达模式，与整合素、CD44及Wnt5a等协同参与胚胎附植和胎盘形成，其表达及滋养层细胞功能受DNA甲基化调控。本研究为解析反刍动物胎盘发育机制，以及提升母羊繁殖效率提供了理论依据。

旨在探讨定时人工授精（timed artificial insemination，TAI）后第7天不同妊娠状态奶牛阴道和粪便菌群结构和血液代谢差异及相关性。本研究选取43头健康奶牛进行同期处理，TAI后第7天采集血液、阴道微生物及粪便样本，TAI后第18~24天采用计步器判定奶牛返情情况，第（33±3）天经直肠超声检查进行妊娠诊断。根据结果将奶牛分为返情组（FQ）、未妊娠组（WRS）和妊娠组（RS），每组选取6头奶牛采用16S rRNA检测阴道和粪便微生物组，LC-MS靶向代谢测定胆汁酸和类固醇激素含量，ELISA检测43个血浆中总抗氧化能力（total antioxidant capacity，T-AOC）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）活性和丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量。结果显示：TAI后第7天，1）妊娠组和返情组奶牛血浆SOD含量显著高于未妊娠奶牛组（P<0.05），妊娠组奶牛MDA含量显著低于未妊娠组；2）3组奶牛血浆胆汁酸和类固醇激素水平均无显著差异（P>0.05）；3）未妊娠组奶牛粪便微生物Chao1指数显著高于妊娠和返情组（P<0.05），Ace指数显著高于返情组（P<0.05）；4）在属水平，阴道微生物妊娠组的Anaerovibrio、Intestinibacter、Eubacterium_hallii_group相对丰度显著高于未妊娠组，粪便微生物返情组的Lachnospiraceae_AC2044_group、Butyrivibrio、Lachnospiraceae_UCG-007相对丰度显著高于妊娠组；5）相关性分析表明，血浆中SOD与阴道中Anaerovibrio、Intestinibacter和Eubacterium_hallii_group呈显著正相关（P<0.05），可能通过提供脂质能量底物助力胚胎发育；与粪便中Butyrivibrio和Proteiniphilum呈显著负相关（P<0.05），可能通过代谢产物干扰全身氧化平衡，破坏胚胎着床的免疫耐受窗口。综上所述，TAI后第7天妊娠奶牛血浆抗氧化能力提升，SOD与特定菌群的相关性揭示了抗氧化代偿与特定菌群代谢紊乱并存的功能性失稳状态，为解析奶牛妊娠建立的微生物-宿主互作机制提供了新的视角。

旨在构建鸡胚原代肝细胞三维（3D）培养方法及其3D脂沉积模型。本研究从15~17 d胚龄的罗曼粉鸡胚中分离原代肝细胞，与0.5%明胶和0.75%海藻酸钠组成的基质溶液混合，再加入Ca²⁺交联剂使之形成3D结构，继续培养肝细胞直至形成肝细胞团，显微观察细胞生长表型和测定细胞的白蛋白合成和尿素代谢速率，与2D贴壁培养比较，表征3D培养效果；再以2D和3D培养的鸡胚原代肝细胞为对照组，处理组添加0.5 mmol·L^-1油酸诱导24、48和72 h，通过油红O染色后显微观察脂滴、测定甘油三酯（TG）含量变化和分析脂代谢相关基因mRNA表达水平，表征3D脂沉积模型的有效性。结果显示，与2D贴壁培养相比，3D培养的肝细胞逐渐形成肝球体，在第7天的直径约为80 μm，其白蛋白合成和尿素代谢速率显著提升（P<0.05），为2D肝细胞的7.5~10倍；3D肝细胞脂代谢相关基因mRNA表达水平显著高于2D肝细胞（P<0.05）。经0.5 mmol·L^-1油酸诱导后，2D和3D肝细胞内均出现明显的脂滴沉积增加及TG含量显著升高（P<0.05）。2D肝细胞在0.5 mmol·L^-1油酸诱导72 h后，显著促进脂肪酸转运蛋白CD36、FABP1和脂肪酸合成酶ACC、FAS、SCD mRNA的表达水平（P<0.05），而脂肪酸氧化相关基因CPT1A、ACOX1、PPARα和甘油三酯水解酶ATGL、HSL、MGLL mRNA的表达水平显著降低（P<0.05）；3D肝细胞在相同的诱导条件下，脂肪酸转运蛋白CD36 mRNA表达水平显著增加（P<0.05），而膜内脂肪酸转运蛋白（FABP1、MTTP）、脂肪酸合成酶（ACC、FAS、SCD）、脂肪酸氧化相关基因（ACOX1、PPARα）和甘油三酯水解酶（ATGL、HSL、MGLL）mRNA的表达均显著降低（P<0.05）。本研究首次构建了鸡胚原代肝细胞3D培养体系及其脂沉积模型，为研究蛋鸡脂肪肝早期发生机制和提高营养调控物质筛选效率提供有利工具。

旨在探究冷季补饲对放牧牦牛生长性能、血液代谢及其瘤胃微生物群落结构的影响。选取同一草场放牧的健康、年龄和体重（167±6.48） kg相近的牦牛26头，按试验设计随机分为2组，每组13头，其中对照组牦牛归牧后不补饲精补料，试验组牦牛归牧后每头牦牛补饲1.5 kg精补料，但对各组牦牛均补饲0.5 kg·头^-1的燕麦青干草，预试期为7 d，正试期为60 d。结果发现，试验组牦牛终末体重、平均日增重均显著高于对照组（P<0.05），且试验组牦牛试验期间体重提高了21.01%。试验组牦牛的血清中GLU的浓度极显著高于对照组（P<0.001），但TC、HDL和LDL的浓度却极显著低于对照组（P<0.001）。与对照组相比，试验组牦牛瘤胃微生物群落的Chao1物种丰富度指数和Shannon多样性指数显著降低（P<0.001），且试验组牦牛瘤胃中拟杆菌门（Bacteroidota）、普雷沃氏菌科（Prevotellaceae）、瘤胃球菌科（Ruminococcaceae）等菌群的相对丰度升高，而厚壁菌门（Firmicutes）、理研菌科（Rikenellaceae）、毛螺菌科（Lachnospiraceae）等菌群的相对丰度降低。同时，罗氏菌属（Roseburia）、琥珀酸弧菌属（Succinivibrio）、厌氧弧菌属（Anaerovibrio）等短链脂肪酸生成菌在试验组牦牛瘤胃显著富集（P<0.05），而奎因氏菌属（Quinella）、依赖杆菌属（Fretibacterium）、颤螺菌属（Oscillospira）等纤维降解菌在对照组牦牛瘤胃显著富集（P<0.05）。综上，冷季放牧牦牛归牧后补饲适量的精补料能显著增加瘤胃短链脂肪酸生成菌的相对丰度，提高了血液中血糖浓度，进而提升了牦牛生产性能。

旨在掌握湖北省宜昌市牛布鲁氏菌病的血清学流行现状及其风险因素。本研究通过开展牛布鲁氏菌病横断面调查，采用虎红平板凝集试验（Rose Bengal Plate Agglutination Test，RBPT）和竞争性ELISA（Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，cELISA）对全市12个养牛区县的6 336个养殖场户的63 237头牛进行普查，并通过问卷调查分析阳性场户的饲养管理及生物安全措施。结果显示，宜昌市83.33%（10/12）的区县为牛布鲁氏菌病阳性区县，全市牛布鲁氏菌病个体真实流行率为0.32%，场户流行率为1.29%。在所有阳性牛中，成年牛的占比高达98.67%（95%CI：94.77，99.77），显著高于犊牛（P<0.05）。风险分析表明，在所有阳性场户中79.71%（95%CI：67.98，88.08）的场户为自繁自养，显著高于外购混养模式的场户（P<0.05）。采用人工授精的阳性场户对精液均未进行布鲁氏菌病原学的检测。外购混养场户在购买新牛时均未对牛进行布鲁氏菌病检测，其中85.71%（95%CI：57.19，98.22）的阳性场户在混群前未进行隔离，占比显著高于混群前隔离的场户（P<0.05）。阳性场户消毒管理均存在疏漏，无入口消毒措施的场户显著高于有入口消毒措施的场户（P<0.05），85.29%（95%CI：74.15，92.35）的场户未对运输车辆进行有效消毒，其占比显著高于对运输车辆进行有效消毒的场户（P<0.05）。本研究显示，宜昌市牛布鲁氏菌病高区县流行率与低个体和场户流行率的特点。未检测人工授精所用精液，外购牛时朱执行布鲁氏菌病的检测与混群前的隔离以及薄弱消毒管理环节为主要风险因素。本研究揭示了自繁自养模式下布鲁氏菌病精液传播的潜在风险，为牛布鲁氏菌病非免疫无疫区的建设提供了关键防控靶点。

为了实现对牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus，BVDV）NS3蛋白的便捷和大规模检测，制备针对NS3蛋白的单克隆抗体并对其进行鉴定、纯化与辣根过氧化物酶（HRP）标记，然后以兔抗NS3蛋白多克隆抗体作为包被的捕获抗体，HRP标记的单克隆抗体作为检测抗体，经过一系列的条件优化与筛选，建立了一种BVDV夹心ELISA抗原检测方法，并对该检测方法的特异性、敏感性和重复性进行评估，应用于临床样品检测，并将检测结果与商品化试剂盒进行符合率分析。结果显示：通过对制备的单克隆抗体筛选和鉴定，选择反应性优良的单克隆抗体4B3进行纯化与HRP标记，优化后的夹心ELISA最佳反应条件：捕获抗体的包被浓度为2 μg·mL^-1；待检样品的稀释度为1∶2，37 ℃孵育45 min；检测抗体的稀释度为1∶2 000，37 ℃孵育45 min；37 ℃避光显色15 min。使用该方法对200份阴性样品进行检测，确定cut-off值为0.154 6。该方法对猪瘟病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛副流感病毒3型、牛支原体均无交叉反应。检测灵敏度试验结果表明，该方法对于不同亚型的病毒样品的最低检出限为10^3.29 TCID₅₀·mL^-1，对于NS3蛋白的最低检出限为0.007 8 μg·mL^-1。该方法的批内和批间变异系数均低于10%。检测601份临床血清和耳组织样品，与商品化试剂盒的检测结果总符合率为97.7%。该夹心ELISA抗原检测方法具有良好的特异性、敏感性与重复性，为BVDV感染动物的快速筛查提供了可靠的技术手段。

随着马立克病病毒（Marek’s disease virus，MDV）毒力的不断增高，疫苗的保护力逐渐被削弱。但近年来，MDV在辽宁省的最新感染情况和分子特征尚无报道。本研究旨在掌握辽宁省MDV感染情况与分子特征。本研究调查了2024年4月‒2025年3月辽宁省11个地市MDV的流行情况，并对其meq基因进行分子特征分析。结果表明，辽宁省主要肉鸡养殖地区的105个鸡场获得的347个临床病例中，32个鸡场（30.48%）的51个样本（14.70%）检测为MDV阳性。对其中14个MDV阳性样本进行meq基因的扩增、测序分析及系统发育分析，结果显示，辽宁省MDV流行病毒主要分为两个进化主干，其中一支主要包含朝阳市、铁岭市、锦州市、本溪市的MDV，其特征与中国MDV超强毒株（S71A、D80Y、T139A、P176R和P217A）相同；另一支包含丹东市MDV，其特征与弱毒株（A71S、Y80D、A139T、R176P和A217P）相同。上述研究数据表明，MDV广泛存在于辽宁省肉鸡群中且多数MDV特征与超强毒株相同，提示今后应加强鸡群免疫及防控。

将近年来新兴的三代测序技术应用于猪流行性腹泻病毒（PEDV）测序，从而简便快速地获得全因基组序列，为PEDV重组与变异研究提供了快捷方法，进而为PEDV流行病学监测及疫苗策略优化提供数据支持。设计7对引物进行全基因组PCR扩增，使用Oxford Nanopore测序平台进行测序。应用Guppy、Medaka、Minimap2等软件完成序列识别、校准、拼接。将获得的序列与参考毒株进行多序列比对和系统发育分析，应用RDP4和SimPlot软件检测重组事件，并分析S基因的重组及变异情况。结果显示：成功获得长度为28 320 bp的完整基因组序列。系统发育分析显示，该毒株属于GⅡb基因型，与经典毒株FL2013和LWL毒株处于同一分支。全基因重组分析发现目标毒株的19 813—20 684 nt段与GⅠb亚型毒株MZ540767-JS-2020-12毒株存在显著重组。S基因的1—167 nt存在类似的重组事件，主要位于S1亚基的NTD端。结合氨基酸变异位点分析推测该区域多个氨基酸位点的变异是由重组引起。这些变化可能引起毒株的抗原性及传播能力变异。综上，三代测序技术是快速获得PEDV全基因组的有效方法，该毒株基因组结构复杂，是以GⅡb毒株为主要亲本，GⅠb毒株为次要亲本的重组毒株，同时在S基因、E基因、N基因、ORF3基因存在多个氨基酸变异位点。研究结果为PEDV分子流行病学研究、疫苗研发及防控策略制定提供了重要参考。

本研究旨在制备马红球菌（Rhodococcus equi，R. equi）疫苗候选抗原alpha/beta水解酶折叠蛋白（ABH）重组蛋白（rABH）并评价其免疫效果，为开发抗R. equi疫苗奠定基础。构建ABH重组质粒，经原核表达及纯化制备rABH。将rABH与弗式完全/弗式不完全佐剂配伍后免疫BALB/c小鼠3次，每次免疫间隔2周，末次免疫后2周腹腔注射感染R. equi，不同时间点监测小鼠生命体征，ELISA检测血清中IgG、IgG1及IgG2a，流式细胞术检测脾脏中TNF-α及IFN-γ阳性淋巴细胞占比，评价其免疫效果。结果显示，制备了符合预期大小及纯度的rABH（67.52 ku）；首免后1周，血清IgG抗体P/N值>2.1，免疫后第6周血清IgG抗体P/N值>15.0；末次免疫后2周，血清IgG1抗体效价为1∶409 600，血清IgG2a抗体效价为1∶204 800；rABH组脾脏T淋巴细胞中TNF-α阳性的CD8⁺和CD4⁺细胞占比均极显著高于对照组（P<0.01），且显著减轻肺脏病理损伤。本研究成功制备了R. equi ABH重组蛋白及亚单位疫苗，小鼠感染试验证实其具有良好的免疫效果。

为研究滑液囊支原体（Mycoplasma synoviae，MS）的大肠杆菌Ras类蛋白（Escherichia coli Ras-like protein，Era）对DF-1细胞的黏附作用和对其凋亡的影响，参照GenBank中MS WVU1853株GTP-binding protein Era的基因设计引物，利用PCR扩增获得MS Era基因，构建重组质粒pET-Era，测序鉴定后，将其转入Escherichia coli Rosetta（DE3）中诱导表达。纯化重组蛋白免疫新西兰白兔获得抗rEra血清，利用Western blot和免疫荧光检测Era蛋白在MS中的分布，利用黏附及黏附抑制试验分析Era蛋白对DF-1细胞的黏附功能，进而通过CCK-8、流式细胞术和Western blot分析Era蛋白对DF-1细胞活力及凋亡的影响。结果显示，MS rEra蛋白在大肠杆菌中成功表达，且Era蛋白在MS的细胞膜和细胞浆中均有分布，但在细胞膜中含量更高，其抗血清可显著抑制MS对DF-1细胞的黏附。流式细胞术和Western blot分析结果表明，rEra蛋白以浓度和时间依赖性抑制细胞活力并诱导细胞凋亡。综上，本研究证实Era蛋白是MS的一种免疫原性膜蛋白，在黏附宿主细胞和诱导宿主细胞凋亡过程中发挥重要作用。

猪鼻支原体（Mycoplasma hyorhinis，Mhr）可引发多发性浆膜炎、关节炎等多组织炎症，给养猪业造成显著的经济损失。体外细胞感染模型是病原微生物致病机制研究的重要工具，在药物和疫苗研发中也具有重要价值。本研究利用原代猪腹膜间皮细胞（PMC）和猪肾上皮传代细胞（PK-15）开展体外Mhr感染试验，比较两种细胞在感染应答方面的异同。结果显示，感染后Mhr可黏附至两种细胞上，黏附量随感染时间延长而增加。Mhr黏附细胞后可迅速增殖，在PMC细胞上的增殖效率高于PK-15细胞。PMC细胞感染后产生明显细胞活力损伤，部分细胞出现皱缩，细胞过氧化氢酶活力显著下降，而PK细胞整体形态及其他指标变化均不显著。PMC细胞感染后促炎性细胞因子基因IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-8转录水平显著上升，PK-15细胞IL-8转录上调，而IL-1β、IL-6、TNF-α无明显变化；PMC细胞胞间连接蛋白编码基因ZO-1、Occludin、Claudin-1、Claudin-11转录显著下降，PK-15细胞Claudin-11、Claudin-1转录下调，而ZO-1、Occludin转录无明显变化；PMC细胞TF、PAI-1转录上调、tPA、uPA转录下降，出现凝血-纤溶平衡失调，而PK-15细胞无明显变化。本研究结果提示两种细胞均可被Mhr黏附感染，PMC细胞在细胞损伤、炎症应答和凝血-纤溶失调方面比PK-15细胞更为敏感，本结果可为Mhr致病机制、疫苗药物研发相关细胞模型的选择提供依据。

为构建针对微小隐孢子虫（Cryptosporidium parvum，C. parvum）Ⅱd亚型的基因编辑平台并获得适用于快速定量检测的Nluc报告虫株，本研究采用CRISPR/Cas9技术，成功构建并鉴定了可稳定表达NanoLuc荧光素酶（Nluc）的C. parvum Ⅱd亚型虫株。通过同源重组策略，将C. parvum胸苷激酶（TK）基因替换为由隐孢子虫烯醇化酶启动子（pENO）驱动的Nluc与新霉素抗性基因（Neo）融合表达框，通过Nucleofection（核转）导入Ⅱd亚型C1HN株子孢子中。随后，通过体内巴龙霉素筛选，成功获得转基因虫株。试验结果显示，该虫株在HCT-8细胞和小鼠感染模型中均能稳定表达Nluc，其增殖能力与致病性与野生型虫株相比无显著差异（P>0.05）。PCR鉴定进一步证实外源基因已正确整合至C. parvum基因组预期位点。本研究成功建立了适用于Ⅱd亚型微小隐孢子虫的遗传操作体系，为该虫种的抗药物筛选及基因功能研究提供了关键技术工具和实验虫株资源。

本研究旨在明确40日龄内哺乳犊牛肠道中隐孢子虫（Cryptosporidium spp.）与梭杆菌（Fusobacterium spp.）的物种/亚型分布和丰度，及二者与腹泻的关联关系。首先采集宁夏4个奶牛养殖区14个牧场384份未腹泻（ND组）和腹泻（D组）犊牛粪便样本，采用PCR法对粪便样本中13种腹泻相关病原进行检测。基于病原检测结果，将部分样本进一步划分为无病原体检出的未感染组（H组）、隐孢子虫单一感染非腹泻组（Cry-only-ND组）及隐孢子虫单一感染腹泻组（Cry-only-D组）。然后通过16S rRNA基因测序与遗传进化分析和实时荧光定量PCR（qPCR）等方法，对隐孢子虫及梭杆菌物种或亚型进行鉴定和定量分析。最后采用非参数检验和Spearman相关性分析评估粪便评分、隐孢子虫卵囊载量和粪便梭杆菌相对丰度的关联关系。结果显示，犊牛粪便中隐孢子虫总检出率为57.55%（221/384），均为微小隐孢子虫（C. parvum），包括IIdA19G1、IIdA15G1和IIdA18G1等3个亚型，其中IIdA19G1为优势亚型（占比87.7%），其次为IIdA15G1（占比11.7%）和IIdA18G1（占比0.4%）。梭杆菌总检出率为49.7%（191/384），以死亡梭杆菌（F. mortiferum）为绝对优势种（占比91.62%），其次为可变梭杆菌（F. varium，占比5.76%）、具核梭杆菌（F. nucleatum，占比2.09%）和溃疡梭杆菌（F. ulcerans，占比0.5%）。腹泻组隐孢子虫卵囊载量和梭杆菌相对丰度极显著高于非腹泻组（P<0.000 1），且随粪便评分升高而显著增加，其中0分与2分组隐孢子虫卵囊载量差异显著（P＝0.034 7）。Cry-only-D组梭杆菌丰度显著高于H组（P＝0.001 1）。Spearman相关性分析表明，隐孢子虫卵囊载量与梭杆菌相对丰度呈中等程度显著正相关（r=0.391 2，P<0.000 1），其中死亡梭杆菌是关联的核心物种。本研究首次明确了宁夏地区40日龄内犊牛隐孢子虫与梭杆菌的共存特征及物种特异性，揭示二者与腹泻显著关联，为犊牛腹泻的协同防控提供了理论依据。

本研究旨在探究褪黑素（melatonin，MT）对脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞（bovine endometrial epithelial cell，bEECs）炎性损伤的修复作用及其分子机制。基于LPS诱导的bEECs损伤模型，评估了褪黑素对bEECs活力、细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡、细胞迁移及细胞修复相关分子TGFB1和CTGF表达的影响。结合网络药理学、分子对接及通路抑制试验探究其机制。结果表明，褪黑素可显著促进损伤后的bEECs增殖和迁移，抑制细胞凋亡，并上调TGFB1和CTGF的表达。网络药理学及分子对接结果提示，HIF-1信号通路是褪黑素调控修复过程的关键通路，且AKT1和HIF-1α为核心分子。HIF-1α抑制剂LW6验证表明，褪黑素通过抑制AKT1/HIF-1α信号通路调控TGFB1和CTGF的表达，从而促进bEECs炎症损伤修复。综上，褪黑素通过抑制AKT1/HIF-1α信号通路，上调损伤修复相关分子的表达，促进bEECs的炎性损伤修复，为临床有效修复产后奶牛子宫内膜损伤提供理论依据。

犬是部分人兽共患病的动物宿主，由于生活环境和饮食习惯的不同，犬的肠道中定植着不同的微生物群落，其组成结构和耐药性的差异可能会对犬只的免疫力和病原传播产生极大影响。旨在探究深圳犬源肠道分离的霍氏肠杆菌和鸡肠球菌的耐药性和遗传进化性。在本试验中，利用宏基因组学确定了犬的肠道微生物群落组成，从其粪便样品中分离鉴定得到一株霍氏肠杆菌和一株鸡肠球菌，通过全基因组测序确定其种属。此外，还进行了耐药性分析和系统发育分析，以揭示分离株的同源性。结果表明，本试验的流浪犬肠道微生物主要以霍氏肠杆菌、屎肠球菌、鸡肠球菌和弗氏柠檬酸杆菌等细菌为主，物种丰富。该霍氏肠杆菌对氨基糖苷类、氟喹诺酮类、四环素类以及多黏菌素保持高度敏感，对青霉素和部分头孢类药物耐药。而鸡肠球菌仅保留对多数β-内酰胺类药物的敏感，对氟喹诺酮类、碳青霉烯类和甲氧苄啶表现出多重耐药。系统发育分析进一步揭示了分离菌株的ST型中与标准菌株存在高度差异性，表明菌株遗传进化的突变性。本研究是国内罕见的从犬的粪便中分离得到鸡肠球菌和ST134型的霍氏肠杆菌并解析二者全基因组数据的分析。在此基础上，本试验深入研究了其抗菌谱和遗传相似性，为进一步探索二者具体的致病性、流行传播和遗传抗生素耐药性转移机制奠定了基础，对于指导抗生素管理计划和管理、控制霍氏肠杆菌和鸡肠球菌的流行传播策略至关重要。

本研究旨在探究现代规模化奶牛养殖体系中，影响产后首配妊娠率（first service conception rate，FSCR）的关键因素，重点关注难产与FSCR关联性，为优化繁殖管理提供数据支持。收集宁夏灵武市某规模化牧场2020年1月—2024年6月共18 558例产犊记录，统计产后疾病、配种方式、产后首配时间及胎次等信息。按难产评分、疾病类型、配种方式及产后配种时间进行分组，采用卡方检验、单因素分析及Tukey HSD检验评估比较分类变量对首配妊娠率的影响，并运用多因素逻辑回归模型分析各因素间的影响效应。结果显示：难产发病率受胎次（χ²=94.06，P<0.01）与怀孕时间（χ²=19.34，P<0.01）极显著影响，第5胎次（35.5%）与怀孕≥287 d组（26.4%）风险最高；犊牛初生重>50 kg时难产率达39.42%。发生难产的奶牛胎衣不下、生殖道炎症与损伤发病率显著高于非难产牛（P<0.01）。多因素Logistic回归分析显示，高胎次（第5胎）、难产及生殖道疾病是导致首配妊娠率（FSCR）下降的独立风险因素（OR分别为0.87、0.90、0.80；P<0.05）。此外，定时输精（TAI）的FSCR（48.38%）显著高于揭发发情AI（41.87%，P<0.05）。综上，难产是降低奶牛首配妊娠率的主要风险因素，其中产犊评分每增加1分，导致首配妊娠率约降低3.6%，同时难产增加产后生殖系统类疾病的发病率，进一步显著降低首配妊娠率。科学的围产期管理、降低难产发生率及合理安排TAI时机，可有效提升规模化牧场的繁殖效率。

本研究旨在成功分离、培养鉴定原代猫角膜缘干细胞（feline limbal stem cells，FLSCs），并将其成功永生化，命名为FLSC-SV40LT细胞。在手术显微镜下活体取材猫角膜缘组织，使用混合酶消化法联合组织贴壁法（NT法）分离并培养FLSCs，经由SV40LT慢病毒感染细胞后成功筛选出永生化FLSC-SV40LT细胞。用BM培养基分别培养FLSC和FLSC-SV40LT细胞，并对两株细胞进行形态、免疫荧光、qPCR和Western blot等检测。结果显示，FLSC-SV40LT细胞与FLSC形态相似，两者均可见ABCG2、p63、Vimentin蛋白表达而K3和K12蛋白不表达，微管蛋白α-Tubulin 与鬼笔环肽的荧光共染均未见多核细胞，CCND1基因的mRNA表达水平接近，且均不造成裸鼠成瘤。CCK-8试验可见FLSC-SV40LT细胞的生长增殖速率明显快于FLSCs。免疫荧光及Western blot结果表明，SV40LT蛋白在各代FLSC-SV40LT细胞中均有表达。qPCR结果显示，ABCG2基因的mRNA转录水平在p3代FLSC-SV40LT细胞中显著偏低（P<0.01）；TP63和VIM基因的mRNA相对转录水平随着代次增加而升高，且差异极显著（P<0.01）；CCND1基因mRNA的相对转录水平与原代差异不显著（P>0.05）；KRT3、KRT12基因mRNA的相对转录水平与原代差异极显著（P<0.01）。本研究成功从猫角膜缘组织中分离、培养并鉴定原代FLSCs，用SV40LT成功慢病毒感染FLSC获得猫角膜缘干细胞永生化细胞系，并命名为FLSC-SV40LT，永生化FLSCs的建立为FLSCs基础研究和临床应用提供了重要基础。

本研究旨在探究大青叶提取物对牛传染性鼻气管炎病毒（infectious bovine rhinotracheitis virus， IBRV）诱导MDBK细胞线粒体损伤的修复作用，为临床上大青叶治疗IBRV感染提供新的参考依据。本研究通过观察CPE并检测线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential，MMP）和活性氧（reactive oxygen species，ROS）水平，以全程处理（预处理、共处理、后处理）、病毒感染前处理（预处理）、病毒感染中处理（共处理）、病毒感染后处理（后处理）的方式探究大青叶提取物对IBRV诱导MDBK细胞线粒体损伤的修复作用。试验结果表明，药物以全过程方式处理细胞，与正常细胞相比较，其细胞形态无明显变化，ROS和MMP差异不具有统计学意义（P>0.05）；与IBRV感染组相比较，其CPE程度减轻，ROS水平极显著降低（P<0.01），MMP显著升高（P<0.05），IBRV gB基因拷贝数极显著下降（P<0.01）。药物以三种方式处理细胞，与IBRV感染组相比较，其CPE程度减轻，其中共处理方式CPE减轻效果最为显著，三种处理方式ROS水平均显著降低（P<0.05），MMP水平显著升高（P<0.05），IBRV gB基因拷贝数显著下降（P<0.05），其中后处理方式的细胞MMP水平极显著升高（P<0.01），预处理和共处理方式的IBRV gB基因拷贝数极显著下降（P<0.01）。说明药物通过三种处理方式均可在不同程度上缓解IBRV造成的线粒体损伤。综上所述，大青叶提取物对MDBK细胞线粒体无损伤作用并且可以抑制并缓解IBRV造成的线粒体损伤。

基于网络药理学和体外试验，探讨连花清瘟胶囊（Lianhua Qingwen capsule，LHQW）及其有效成分对猫传染性腹膜炎病毒（feline infectious peritonitis virus，FIPV）的作用及其分子机制。首先，采用CCK-8试验确定LHQW对CRFK和Fcwf-4细胞的安全浓度；在此基础上，通过qRT-PCR和Western blot等方法，评估LHQW对FIPV复制的影响及相关机制。其次，结合网络药理学分析及已有文献，筛选出LHQW中10种潜在抗FIPV有效成分；进一步通过分子对接、qRT-PCR、IFA和Western blot评价这些化合物对FIPV复制的抑制效果，并利用选择性指数（selectivity index，SI）筛选出抗FIPV效果最佳的化合物。结果显示：LHQW在无细胞毒性浓度范围内，以剂量依赖方式显著抑制FIPV复制。LHQW与FIPV共同处理时抑制效果最显著，无细胞共孵育试验进一步证实LHQW对FIPV病毒颗粒具有直接作用。初步筛选获得的10种LHQW有效成分包括草质素、汉黄芩素、圣草酚、槲皮素、香木叶素、金合欢素、异鼠李素、山柰酚、芫花素和木犀草素；结果显示，异鼠李素的抗FIPV活性最佳，优于香木叶素和芫花素。LHQW主要通过直接作用于FIPV病毒颗粒发挥抗病毒作用；活性成分筛选表明，异鼠李素具有较好的抗病毒潜力，提示其可作为抗FIPV的候选化合物进一步研究。本研究不仅为猫传染性腹膜炎的治疗提供了潜在药物选择，也为中药复方活性成分的筛选与研究提供重要参考。

本研究旨在探究土槿皮乙酸（pseudolaric acid B，PAB）抑制犬乳腺癌细胞增殖的分子机制。选用犬乳腺癌U27细胞系，以不同浓度的PAB处理U27细胞，采用结晶紫试验检测细胞增殖能力；采用细胞划痕试验检测细胞迁移水平；通过显微镜观察细胞形态变化；通过转录组测序，分析筛选差异表达基因；分子对接预测PAB与β微管蛋白 I（tubulin beta class I，TUBB）蛋白的结合能力，荧光定量PCR和蛋白免疫印迹试验评估PAB对TUBB在转录和蛋白表达水平的影响。结果表明，与对照组相比，PAB显著抑制U27细胞增殖、迁移能力，改变细胞形态；在909个差异表达基因中，结合前期试验，筛选出PAB调控U27细胞增殖的潜在靶点TUBB；且PAB与TUBB有直接结合位点并具有较强的结合能力；与对照组相比， TUBB在转录和蛋白水平表达显著降低。综上所述，PAB可通过抑制TUBB的表达，从而有效抑制犬乳腺癌细胞增殖，这可能是其发挥抗肿瘤作用的重要分子机制之一。