畜牧兽医学报 ›› 2009, Vol. 40 ›› Issue (3): 409-415.doi:
丁军涛1,2,骆学农1,王颖1,张少华1,陈晓宇1,3,郑亚东1,景志忠1,才学鹏1*
DING Jun-tao1,2, LUO Xue-nong1, WANG Ying1, ZHANG Shao-hua1, CHEN Xiao-yu1,3, ZHENG Ya-dong1, JING Zhi-zhong1, CAI Xue-peng1*
摘要: 定点突变猪带绦虫六钩蚴(oncosphere)Tsol18基因的4个碱基,并截去其N端16氨基酸信号肽的编码序列,构建pGEX-Tsol18-sp表达载体,IPTG诱导表达后进行产物的SDS-PAGE、Western blot及稳定性分析;取该基因修饰前、后所表达的重组蛋白免疫猪,以ELISA检测抗体水平,并通过屠宰检虫评价、比较免疫效果。结果显示:修饰后的Tsol18-sp基因共有7个碱基发生同义突变,表达产物主要是约38.7 ku的可溶性融合蛋白,在4 ℃保存2个月后约降解20.1%,能与猪带绦虫六钩蚴阳性血清反应;TSOL18和TSOL18-sp抗原免疫试验猪后均能诱导高水平抗体的产生,但TSOL18-sp抗原的保护率较TSOL18抗原有明显的提高(100% vs 20%)。表明Tsol18经修饰后,其重组表达产物的生物学活性和稳定性都有很大改善,可作为囊虫病免疫预防的候选抗原。