畜牧兽医学报 ›› 2014, Vol. 45 ›› Issue (9): 1555-1560.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2014.09.025
张亮1,2,田耕1,2,石双艳1,2,袁磊1,2,刘澣扬1,2,黄小波1,2,3,伍锐1,2,3,文心田1,2,3,文翼平1,2,3,曹三杰1,2,3*
ZHANG Liang1,2,TIAN Geng1,2,SHI Shuang-yan1,2,YUAN Lei1,2,LIU Han-yang1,2,HUANG Xiao-bo1,2,3,WU Rui1,2,3,WEN Xin-tian1,2,3,WEN Yi-ping1,2,3,CAO San-jie1,2,3*
摘要:
建立一种可检测及鉴别基因Ⅰ型和基因Ⅲ型日本脑炎病毒(JEV)的RT-PCR-RFLP方法。通过对JEV基因Ⅰ型(GⅠ)和基因Ⅲ型(GⅢ)核酸序列的比对分析,设计1对特异性引物对JEV C-PrM-E区域部分基因进行RT-PCR扩增,扩增产物经限制性内切酶SpeⅠ消化后于15 g•L-1琼脂糖凝胶电泳进行RFLP分析,并利用建立的RT-PCR-RFLP方法对78份临床样品进行了JEV的检测及基因型鉴定。结果显示,特异性引物可扩增出长为819 bp的片段,而对猪瘟病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒及猪伪狂犬病毒的核酸扩增结果均为阴性。经SpeⅠ酶切,基因Ⅰ型JEV RT-PCR产物被切为568和251 bp 2个条带,基因Ⅲ型JEV RT-PCR产物被切为446、251和122 bp 3个条带,基因Ⅰ型和基因Ⅲ型JEV混合RT-PCR产物被切为568、446、251和122 bp 4个条带,该方法最低可检出1.5 pg•μL-1的JEV RNA。RT-PCR-RFLP结果显示78份临床样品中有14份为JEV阳性,其中6份为基因Ⅰ型,8份为基因Ⅲ型,与核苷酸测序分析结果一致。本研究为日本脑炎病毒的实验室诊断及基因Ⅰ型和基因Ⅲ型的鉴别提供了一种快速有效的分子生物学方法。
中图分类号: