| 预防兽医 |
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| 山羊痘病毒ORF8～ORF18缺失重组毒株的构建和鉴定
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郑敏1,2，刘棋1，金宁一2*，施开创1，梁媛1，莫胜兰1，屈素洁1，陆文俊1，胡博2 |
1. 广西动物疫病预防控制中心，南宁 530001；2. 军事医学科学院军事兽医研究所，长春 130062
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收稿日期 2009-9-4
修回日期
网络版发布日期
接受日期
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摘要 本研究旨在通过敲除山羊痘病毒（GTPV）大段基因组片段尝试构建安全性更好的基因工程减毒株和病毒表达载体。采用PCR方法，克隆了GTPV AV41株基因组ORF7～ORF8间1 242 bp的基因片段，以及ORF18～ORF19间1 355 bp的片段。接着分别以上述2片段作为左、右侧同源重组臂，构建了包含报道基因EGFP和抗性基因gpt的GTPV重组转移载体pCFEg。然后采用脂质体介导法，将重组转移载体pCFEg与GTPV AV41株共转染原代羊睾丸细胞，通过空斑纯化筛选阳性重组病毒，并鉴定重组病毒的遗传稳定性和生长特性。 结果成功获得1株敲除掉ORF8～ORF18间9个ORF、长达7 kb基因组片段的重组病毒vCFEg。该重组病毒能稳定表达绿色荧光蛋白至少10代，并且其增殖滴度与亲本毒株基本相同。表明上述区域是GTPV的复制非必需区。
关键词
山羊痘病毒；重组病毒；基因缺失；病毒载体
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