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| 畜牧兽医学报 2007 38 (5): 506-512 ISSN: 0366-6964 CN: 11-1985/S 首页
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| 猪β-干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其活性
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姚清侠,曹毅,钱平,徐卓菲,何雁南,司有辉,陈焕春 |
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收稿日期
修回日期
网络版发布日期
接受日期
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摘要 为了高效表达分泌型的猪β-干扰素，将去除信号肽的编码梅山猪β-干扰素成熟多肽基因（mPoIFNβ）插入酵母－大肠杆菌穿梭载体pPIC 9K，构建成分泌型重组表达载体pPIC 9K-mPoIFNβ。将以SalⅠ线性化的pPIC 9K-mPoIFNβ用化学方法(LiCl)，与鲑鱼精DNA (ssDNA)共转化入毕赤酵母菌株GS115，转化子经MD平板筛选和PCR鉴定后获得阳性菌株，再经高浓度G418筛选到多拷贝菌株。以1%甲醇连续诱导4天，SDS-PAGE和Western blot检测结果表明：表达产物为22kD和26kD的混合物，在GS115中的表达量约为80mg/L，占分泌型总蛋白的29.4%–30.8％，表明猪β-干扰素基因在毕赤酵母中获得了高效分泌表达。对表达产物进行理化分析发现，重组酵母菌表达的蛋白耐酸(pH2)，对热(56℃)部分敏感，并能被特异性的抗猪β-干扰素抗体中和而不与抗猪γ-干扰素抗体反应。以细胞病变抑制法(CPE50)测定干扰素抗病毒活性，在MDBK（牛肾细胞系）中表达的猪β-干扰素的抗VSV比活性达到2.0×106U/mg；对口蹄疫病毒在IBRS-2细胞中的增殖也有明显的抑制作用。
关键词
猪β-干扰素
毕赤酵母
分泌表达
抗病毒活性
口蹄疫病毒
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| 分类号
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| DOI: |
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通讯作者:
作者个人主页: 姚清侠;曹毅;钱平;徐卓菲;何雁南;司有辉;陈焕春
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